Cefalexina 102

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La interacción farmacocinética entre JBP485 y cefalexina en ratas Jian Zhang. Changyuan Wang. Liu Qi. Meng Qiang. Jian Cang. Huijun Sun. Ying Gao. Taiichi Kaku y Kexin Departamento Liu de Farmacología Clínica, Facultad de Farmacia (JZCWQLQMJCHSKL), y la clave Laboratorio Provincial (YG), Dalian, Liaoning, Universidad Médica de Dalian, China y Japón Bioproducts Industria Co. Ltd. Tomigaya, Shibuya-ku, Tokio, Japón (TK) Dirección correspondencia a: Dr. Kexin Liu, Departamento de Farmacología clínica de la Facultad de Farmacia de la Universidad médica de Dalian, Sección 9 West, Lvshun camino del sur, Lvshunkou District, Dalian 116044, china. E-mail: kexinliu dlmedu. edu. cn Resumen El propósito de este estudio fue investigar el mecanismo farmacocinético de interacción entre JBP485 (ciclo - trans-4- l l - hydroxyprolyl - serina, un dipéptido) y cefalexina cuando se administraron conjuntamente en ratas. Las concentraciones plasmáticas de JBP485 y cefalexina eran ambos disminuyó significativamente después de la combinación oral, pero se observó poca diferencia después de la administración intravenosa simultánea de los dos agentes, lo que sugiere que el objetivo de la interacción localizada en el intestino durante el proceso de absorción. La captación en sacos intestinales evertidos y absorción en perfusiones de yeyuno de JBP485 y cefalexina se redujo drásticamente después de la combinación de fármacos. Cuando se administraron conjuntamente JBP485 y cefalexina, tanto en la reducción de la excreción renal acumulativa (81.968.1 de JBP485 y 91.874.5 de cefalexina) y en la depuración renal (2.891.87 ml / min / kg JBP485 y 2.231.58 ml / min / kg cefalexina) indicó que el transportador (s) distinto de H transportador / péptido (PEPT) 2 están involucrados en el proceso de excreción. El probenecid puede reducir la excreción renal de JBP485 y cefalexina. Por otra parte, la disminución de la captación de JBP485 con probenecid, p - aminohippuate, o bencilpenicilina en rodajas de riñón podría explicarse por una inhibición en el riñón a través de transportadores de aniones orgánicos (avena), al menos en parte. La acumulación de JBP485 en (h) OAT1- humano o de riñón embrionario hOAT3-humano (HEK) 293 células fue mayor que en las células HEK293 por vectores, y la absorción puede ser inhibida por probenecid. Estos hallazgos confirman además que el mecanismo farmacocinético de la interacción fármaco-fármaco entre JBP485 y cefalexina podría explicarse por su inhibición de los mismos transportadores en la mucosa intestinal (PEPT1) y los riñones (PEPT2 y avena). Proporcionamos la primera evidencia de que JBP485 no sólo es un substrato de PEPTs pero también se excreta a través de la avena. las interacciones entre fármacos derivados de la inhibición de los mismos transportadores pueden dar lugar a efectos adversos. Algunos fármacos con interacciones dañinas entre medicamentos han sido retirados del mercado. Numerosos sistemas de transportador de aminoácidos son responsables de la absorción de los aminoácidos libres, mientras que la absorción de di - y tripéptidos se consigue por la baja afinidad / alta capacidad transportador de péptido intestinal (PEPT1). PEPT1 se expresa principalmente en la membrana del borde en cepillo del intestino delgado (Leibach y Ganapathy, 1996). PEPT2 se expresa específicamente en el (luminal) de membrana apical de las células epiteliales de los túbulos proximales del riñón. Ellos son responsables no sólo para el transporte de nutrientes a través de las membranas celulares de absorción, sino también para la absorción (en el intestino delgado) y la reabsorción (en los riñones) de péptidos o compuestos similares a péptidos, tales como los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina, cefadroxilo, y valaciclovir (Ganapathy et al. 1994). trans - ciclo - 4- l - hydroxyprolyl - l serina (JBP485) es un dipéptido (Liu et al. 2000) (Fig. 1 A) primero aislado de Laennec (Yang et al. 2009), que es un producto patentado hecho a partir del hidrolizado de placenta humana (Annaert y Brouwer, 2005) en Japón, y se ha sintetizado por medios químicos. Los experimentos con animales han indicado que exhibe JBP485 hígado obvio efectos protectores después de la administración oral (Liu et al. 1998 Wu et al. 2008 Yang et al. 2009). JBP485 fue bien absorbido a través del tracto gastrointestinal. Nuestros estudios previos han demostrado que su absorción puede ser inhibida por glycylsarcosine (Gly-sar), que es un fármaco modelo dipéptido y el sustrato de PEPTs. Estos estudios han sugerido que JBP485 es reconocido por el sistema transportador de péptido en el tracto gastrointestinal. Cefalexina, como una cefalosporina oral de primera generación (Fig. 1 B), tiene un amplio espectro de actividad antibacteriana (Ogawa et al. 1994). Ya se ha demostrado que los dipéptidos y compartir cefalexina ciertas características estructurales, tales como un enlace peptídico con un grupo amino y un grupo ácido carboxílico terminal (Bretschneider et al. 1999). Esta similitud estructural es al parecer la base para el mimetismo molecular, permitiendo los transportadores de péptidos para aceptar cefalexina como sustrato (Amidon y Lee, 1994). La absorción oral de cefalexina es rápido y seguro. Por otra parte, se cree que la secreción renal de la mayoría de las cefalosporinas estar mediada por transportadores de aniones orgánicos (avena) situados en la membrana basolateral del epitelio túbulo proximal (Takeda et al. 2002 Shitara et al. 2003). Las estructuras químicas de JBP485 (A) y cefalexina (B). MW, de peso molecular. Estrategias se han utilizado para modificar los fármacos que se absorben mal por la orientación hacia los receptores / transportadores para mejorar la biodisponibilidad (Sakaeda et al. 2001 Anand et al. 2002 Manfredini et al. 2002). Para observar si la combinación de JBP485 y cefalexina afecta a cualquiera de los componentes, para identificar el mecanismo farmacocinético (s) de la interacción, y para proporcionar un fundamento para el uso clínico de la combinación de fármacos, hemos establecido un método LC-MS / MS para la determinación de JBP485 y cefalexina. Se utilizó in vivo la administración oral, en perfusiones intestinales in situ, in vitro evertido pequeñas preparaciones intestinales salida, en vivo excreción urinaria, rebanadas renales in vitro, y estudios de captación de células transfectadas para investigar el cambio en la farmacocinética cuando JBP485 y cefalexina se utilizaron juntos. Nuestros resultados para la excreción renal primera JBP485 indicaron que podría ser un sustrato de avena. Estos resultados demuestran la importancia de reconocer que, cuando JBP485 y cefalexina se administran conjuntamente, los transportadores de destino no son sólo PEPTs sino también la avena. Materiales y métodos Productos químicos. JBP485 fue proporcionado por Japón Bioproducts Industry Co. Ltd. (Tokio, Japón). Los patrones de referencia de la cefalexina y paracetamol (patrón interno), con una pureza de 99,0, fueron adquiridos por el Instituto Nacional para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos (Pekín, China). Probenecid, p - aminohippurate (PAH), bencilpenicilina (PCG), y Gly-sar se adquirieron de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). El metanol fue de alto rendimiento de cromatografía líquida de grado (Tedia, Carson City, NV). Los transfectantes estables que expresan hOAT1- o hOAT3-HEK293 y células vector (simulacro) fueron un generoso regalo del profesor Yuichi Sugiyama, Facultad de Ciencias Farmacéuticas de la Universidad de Tokio (Tokio, Japón) y Li-kun Gong (Shanghai Instituto de Materia medicable , Academia de Ciencias de china, Shanghai, china). Todos los otros reactivos y disolventes eran de calidad analítica, y estaban disponibles comercialmente. Animales. Las ratas macho Wistar que pesaban 220 a 250 g se obtuvieron del Centro Experimental Animal de la Universidad Médica de Dalian (Dalian, China número de permiso SCXK 2.008 hasta 0.002). Se les permitió acceso libre a agua y pienso dieta, pero se mantuvieron en ayunas durante 12 h con agua ad libitum antes de los experimentos farmacocinéticos. Todos los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices institucionales locales para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Farmacocinéticas Los estudios de interacción en ratas. En todos los casos, las ratas se mantuvieron en ayunas durante la noche y se anestesiaron con éter antes del inicio de cada experimento. JBP485 y cefalexina se disolvieron en solución salina o tampón normal y administrar a las ratas en solución acuosa. En el experimento de absorción in vivo en ratas. Las ratas se dividieron aleatoriamente en tres grupos: 1) JBP485 solo (25 mg / kg) como control 2) cefalexina solo (50 mg / kg) como control y 3) JBP485 (25 mg / kg) cefalexina (50 mg / kg) como el grupo experimental. Los fármacos se administraron por vía oral por sonda. Las muestras de sangre se recogieron a 1, 5, 10, 20, 30, 60, 120, 180, 240, 360, 480, y 600 min para JBP485 y determinación cefalexina, como se describe a continuación. In vitro evertido preparación saco intestinal. Se abrió el abdomen mediante una incisión en la línea media, y el yeyuno se eliminó por corte a través del extremo superior del duodeno (es decir, 2 cm distal al ligamento de Treitz) y el extremo inferior del íleon y pelar manualmente el mesenterio. El intestino delgado se lavó cuidadosamente con solución salina oxigenada normal de frío, usando una jeringa equipada con un extremo romo. segmentos intestinales (10 1 cm) se evertidos de acuerdo con la técnica convencional descrita por Wilson y Wiseman (1954) con modificaciones. El intestino evertido se colocó en glucosa-solución salina a temperatura ambiente en un plato plano. Una ligadura de hilo se ata alrededor de un extremo para facilitar su posterior identificación y para verificar la perforación. El saco vacío se llenó con 1 ml de tampón de Krebs-Ringer (KRB) (pH 7,4) conteniendo 0,5 mM de MgCl2. KCl 4,5 mM, NaCl 120 mM, 0,7 mM de Na 2 HPO 4. 1,5 mM NaH 2 PO 4. 1,2 mM CaCl 2. 15 mM de NaHCO3. glucosa 10 mM, y 20 mg / l de phenolsulfonphthalein como un marcador no absorbible. El saco distendido se colocó en medio de incubación (solución de la mucosa), que contiene JBP485 mM 1) 0.5, 2) cefalexina 1 mM, y 3) mM cefalexina mM 0,5 JBP485 1. El medio de incubación fue rodeado por una camisa de agua mantenido a 37ºC. Se hizo burbujear una mezcla gaseosa de 95 O 2 y 5 CO 2 a través del medio de incubación externa durante el período de incubación. Al final del periodo de incubación, el líquido seroso se drenó a través de una pequeña incisión en un tubo de ensayo. Las muestras se recogieron para la determinación JBP485 y cefalexina como se describe a continuación. En yeyunal técnica de perfusión in situ. Una laparotomía se realizó después de anestesia con éter, y se insertó una cánula de flujo de entrada de tubo de Silastic en el yeyuno aproximadamente 1 cm por debajo del ligamento de Treitz (Zhang et al. 2009). Una cánula de salida se estableció a una distancia de 10 cm. El conducto biliar se ligó para evitar la posible circulación enterohepática. entonces el segmento yeyunal se lavó abundantemente con solución salina (precalentado a 37ºC) para eliminar el contenido intestinal residuales. solución de perfusión oxigenada se suministra con una bomba peristáltica a una velocidad de flujo de 4 ml / 15 min a través de una a 37 ° C, antes de su entrada en el segmento yeyunal con camisa de agua del tubo de entrada. La solución para perfusión yeyunal era el mismo que el KRB anteriormente. Después de un periodo de equilibrio de 30 min, 0,5 mM JBP485 solo, cefalexina 1 mM solo, o mM JBP485 cefalexina 0,5 1 mM disuelto en KRB se administró. se recogió sangre de la vena porta usando una aguja de la vena-detenido, comprado a una clínica, en ciertos momentos para JBP485 y determinación cefalexina, como se describe a continuación. En la concentración plasmática in vivo y la excreción renal. Las ratas se anestesiaron con éter y se agrupan de acuerdo con el siguiente método y con la administración intravenosa a través de la vena yugular: 1) JBP485 (25 mg / kg), 2) cefalexina (50 mg / kg), o 3) JBP485 (25 mg / kg ) cefalexina (50 mg / kg). Las muestras de sangre se recogieron a 1, 5, 10, 30, 60, 120, 240, 360, 480, y 600 min. La vejiga se canuló con un tubo de polietileno, el extremo distal de los cuales fluyó en un tubo de reposo Eppendorf en una pequeña almohadilla de hielo (Zhang et al. 2009). Se recogió la orina directamente de la vejiga a las 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, y 24 h. Además, los dos fármacos se administraron conjuntamente con probenecid (100 mg / kg). Se midieron las concentraciones de JBP485 y cefalexina. La excreción urinaria acumulada y el aclaramiento renal se calcularon. En la absorción vitro en cortes de riñón. Las ratas fueron anestesiados con éter y se fijan en la posición supina sobre los riñones mesa de operación fueron incisas, decapsulated, e inmediatamente se colocaron en tampón oxigenado a 4 ° C como se describe por Nozaki et al. (2007). Se investigó la viabilidad de las rebanadas de riñón por la captación de PAH (un sustrato clásico de OAT1) de una manera dependiente de la concentración. En resumen, los riñones fueron cortados en rodajas con precisión utilizando una máquina de cortar el tejido ZQP-86 (espesor de 300 m, área superficial de aproximadamente 0,15 cm 2 Zhixin Co. Ltd Shanghai, China) y preparado en tampón. Después de la preincubación durante 3 min en una atmósfera de carbógeno a 37ºC en placas de cultivo de 6 pocillos con agitación suave, las rebanadas de riñón se transfirieron a placas de cultivo de 24 pocillos que contenían JBP485 carbógeno saturada fresca y / o cefalexina para una incubación adicional. Además, JBP485 en presencia o ausencia de Gly-sar (20 mM), probenecid (2 mM), PAH (0,5 mM), o PCG (0,5 mM) se utilizó. La absorción se midió a 0, 1, 5, 10, y 15 min. Al final del periodo de incubación, las rebanadas de riñón se lavaron con solución enfriada con hielo salina equilibrada de Hanks (HBSS) (pH 7,5). concentraciones acumuladas de JBP485 y cefalexina se determinaron por LC-MS / MS después de que las rebanadas renales se homogeneizaron. tampón de Krebs-bicarbonato de corte consistía en NaCl 120 mM, KCl 16,2 mM, 1 mM CaCl 2. 1,2 mM MgSO4. y 10 mM NaH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4. ajustado a pH 7,4. Los experimentos de absorción usando sistemas de expresión Transporter. experimentos de absorción con hOAT1- o hOAT3-HEK293 y células simuladas se realizaron a 37ºC en HBSS se ajustó a pH 7,4. Las células cultivadas se lavaron y se incubaron previamente en el tampón de transporte durante 15 minutos a 37ºC. La absorción se inició mediante la adición de tampón de transporte (1 ml) fármacos que contienen incluyendo JBP485 (0,5 mM), con o sin cefalexina (1 mM). Después de incubar durante los tiempos designados a 37ºC, el experimento se terminó por la eliminación del medio, seguido por lavado tres veces con 1 ml de HBSS enfriado con hielo. También se investigó la inhibición de probenecid (2 mM), PAH (0,5 mM), y PCG (0,5 mM). Las muestras se analizaron entonces por LC-MS / MS después de la homogeneización. Determinación de JBP485 y cefalexina por LC-MS / MS. Se añadieron muestras de plasma (50 l) a 50 l de la solución de patrón interno (200 paracetamol ng / ml) y 400 l de alcohol metílico para la desproteinización. Después de centrifugación a 12.000 g durante 10 min, la capa orgánica superior se transfirió a un tubo de polietileno y se secó con nitrógeno a 37ºC. El residuo seco se disolvió en 200 l de la fase móvil. Las muestras de orina se diluyeron 20 veces con la fase móvil. Las otras preparaciones fueron las mismas que las muestras de plasma. Las rodajas de riñón se mezclaron con 300 l de solución salina normal después de pesar y luego homogeneizaron (IKA-T10 homogeneizador IKA, Staufen, Alemania) en un entorno de baño de hielo. Las otras preparaciones se manejan de la misma como las muestras de plasma. Para muestras de KRB y lisado celular (25 l), 25 l de patrón interno (200 ng / ml paracetamol), se añadió 50 l de cianuro de metilo, seguido por centrifugación durante 10 min a 12.000 g. Se inyectaron diez microlitros de cada muestra para LC-MS / MS (API 3200 Applied Biosystems, Foster City, CA) para el análisis. Análisis de los datos. Farmacocinética de JBP485 y las concentraciones plasmáticas de cefalexina. Los principales parámetros farmacocinéticos se calcularon de acuerdo con el programa de 3P97. La calidad del ajuste fue juzgado por la evaluación de la S. E. de las estimaciones de los parámetros y el coeficiente de determinación (r 2) y mediante inspección visual de los gráficos de residuos. Los principales parámetros farmacocinéticos se calcularon utilizando las Ecs. 1 a 5. El aclaramiento plasmático (CL p) se calculó por la siguiente: donde AUC i. v. es el área bajo el perfil de concentración plasmática-tiempo después de la inyección intravenosa. La disponibilidad oral (F) se calculó como sigue: donde p. o. AUC es la AUC tras la administración oral. Se calculó mediante la regla trapezoidal. El aclaramiento renal de JBP485 o cefalexina (CL r) se calcula de la siguiente manera: en la que A total es la cantidad acumulada de JBP485 o cefalexina excretada en la orina durante 24 horas. El aclaramiento absorción de JBP485 o cefalexina (captación CL) se calcula como sigue: donde A total es la cantidad acumulada absorción de JBP485 o cefalexina en rodajas de riñón durante 60 min. AUC (060) es el área bajo la curva de concentración-tiempo JBP485 o cefalexina plasma de 0 a 60 min, como se determina por la regla trapezoidal. Análisis estadístico. El análisis estadístico se realizó utilizando el paquete SPSS11.5. Los resultados del ensayo se expresan como medias S. D. Para probar las diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos múltiples para un parámetro dado, se realizó un análisis unidireccional de la varianza. Si p 0,01, se consideraron estadísticamente significativas diferencias. Resultados interacción farmacocinética entre JBP485 y cefalexina en forma intravenosa y oral in vivo. Para entender el objetivo de la interacción entre JBP485 y cefalexina, los fármacos se administraron simultáneamente por la vía intravenosa u oral. Como se muestra en la Fig. 2. A y B, cuando los dos fármacos se administraron por vía oral en combinación, sus concentraciones en plasma y la AUC se redujo significativamente en comparación con los de los grupos control. Las AUCs de JBP485 y cefalexina sólo eran 35,2 y 23,4 de los de los grupos de control respectivas, y la K a valores de JBP485 y cefalexina fueron aproximadamente 70 y 50 de los de sus grupos de control, respectivamente. Además, los otros datos cinéticos para JBP485 tales como t 1/2 (2 veces), T max (retardada), C max (reducido a casi 10), el tiempo medio de retención (aumento de aproximadamente 2,4 veces), y F ( caído a 35) se cambiaron todos después de la combinación de fármacos en comparación con la administración única. Estos parámetros para la cefalexina mostraron cambios similares cuando se administró junto con JBP485 (Tabla 1). Sin embargo, cuando la cefalexina y JBP485 se administraron conjuntamente por vía intravenosa, sus concentraciones plasmáticas y los parámetros farmacocinéticos eran casi sin cambios en comparación con los de los grupos de control correspondientes (Fig. 2. C y D Tabla 1). La media de plasma curvas de concentración-tiempo de JBP485 y cefalexina después de la administración oral e intravenosa en ratas. A, la concentración plasmática de JBP485 después de la administración oral. B, la concentración plasmática de cefalexina después de la administración oral. C, la concentración plasmática de JBP485 después de la administración intravenosa. D, la concentración plasmática de JBP485 después de la administración intravenosa. Las diferencias estadísticas entre cada conjunto de puntos se compararon con los de los grupos de control por una prueba t no pareada de dos colas, con p 0,01). Los datos se expresan como medias S. D. (N 5). Se espera que Discusión interacciones clínicas fármaco-fármaco para mejorar el efecto beneficioso de un fármaco particular o reducir su toxicidad. Sin embargo, algunas combinaciones de fármacos aumentará el efecto tóxico o reducir el efecto farmacológico estos son interacciones indeseables entre fármacos. Los antibióticos se utilizan ampliamente, y es importante prestar atención a los efectos potencialmente adversos cuando los antibióticos se combinan con otros fármacos. Debido a la amplia especificidad de sustrato de transportadores de fármacos, las interacciones fármaco-fármaco que implican estos transportadores surgen con frecuencia. Quinidina, que es un inhibidor de la P-glicoproteína, podría aumentar las concentraciones plasmáticas de digoxina porque los bloques quinidina biliar y la excreción urinaria de la digoxina a través de P-glicoproteína (Hedman et al., 1991). Debido a que el rango terapéutico de la digoxina es estrecha, los cambios en su concentración plasmática son potencialmente muy grave. La investigación y desarrollo de fármacos peptídicos es un área de interés mucho más actual. Se conocen oligopéptidos que se absorbe a través de la membrana PEPT1 del borde en cepillo en las células epiteliales intestinales (Kusuhara y Sugiyama, 2002). antibióticos beta-lactama con una estructura de amida único también pueden ser reconocidos por PEPTs (Berggren et al. 2004 Daniel y Kottra, 2004) en los intestinos. Por lo tanto, cuando se combina con la otra, su efecto farmacológico se verá afectada. Con esto en mente, en este estudio hemos creado un método LC-MS / MS sensible y eficaz para la detección simultánea de JBP485 y cefalexina para interpretar el mecanismo (s) de su interacción, proporcionando una base sólida para la terapia clínica. Cuando JBP485 (25 mg / kg) y cefalexina (50 mg / kg) se administraron juntos por vía oral, sus concentraciones en plasma se redujeron significativamente en comparación con los de los grupos de control (Fig. 2. A y B). La biodisponibilidad de JBP485 se redujo a 35 del grupo de control y la de la cefalexina se redujo a 23 del grupo control (Tabla 1). Estos resultados indican que hay una inhibición mutua evidente en la absorción intestinal cuando los fármacos se coadministran oralmente. K a valores eran sólo aproximadamente la mitad de los de sus grupos de control correspondientes después de la combinación oral (Tabla 1), lo que indica que la velocidad de absorción de los dos fármacos se retrasa significativamente. Estos resultados muestran claramente que cuando los fármacos de péptidos y antibióticos lactámicos se coadministran por la ruta oral, la extensión y la velocidad de su absorción se inhibieron tanto, obviamente causando su efecto terapéutico a estar deprimido. Sin embargo, no había ningún fenómeno de inhibición cuando JBP485 y cefalexina se administraron por vía intravenosa al mismo tiempo (Fig. 2. A y B) no hubo diferencias estadísticamente significativas en la CL p. AUC, y K e (Tabla 1). El contraste farmacocinética entre las dos vías de administración indicó que el intestino delgado es la ubicación de la interacción entre JBP485 y cefalexina. Nos centramos en el intestino delgado, el uso de sacos intestinal dado la vuelta para observar la interacción entre JBP485 y cefalexina. La cefalexina es generalmente aceptado como un sustrato de PEPTs (Berggren et al. 2004). Cuando JBP485 y cefalexina se utilizaron simultáneamente, las concentraciones respectivas en el lado de la serosa se reducen tanto (Fig. 3. A y B), lo que sugiere que JBP485 se absorbe a través PEPT1 en el tracto gastrointestinal in vitro. Para confirmar esta especulación, aplicamos también perfusiones yeyunal in situ para investigar el mecanismo de la interacción entre JBP485 y cefalexina. Se encontró que las concentraciones de los dos fármacos en la vena portal fueron significativamente más bajos que en el respectivo grupo de control, respectivamente (Fig. 4. A y B). Estas observaciones indican que JBP485 y cefalexina pueden competir por PEPT1 en el intestino delgado y que el mecanismo de interacción fármaco-fármaco implica la inhibición de la absorción de la otra. PEPT1 se expresa ampliamente en el intestino delgado, y PEPT2 tiene un alto nivel de expresión en los riñones (Ganapathy et al. 1998). Para comprender la interacción entre JBP485 y cefalexina en la excreción renal, se utilizó la cateterización de la vejiga para observar la excreción urinaria acumulada de los dos fármacos durante 24 horas después de JBP485 y cefalexina se administran juntos a través de la administración intravenosa. Se encontraron La excreción urinaria acumulativa (Fig. 5. A y B) y el aclaramiento renal (Fig. 5. C y D) que se reduzca significativamente en comparación con los de los grupos control. Como es bien sabido, PEPT2 es responsable de la reabsorción tubular de drogas (transportadores de absorción). Nuestro estudio anterior (Zhang et al. 2009) mostró que cuando cefditoren (cefalosporina) y Gly-sar (oligopéptido) se usan juntos, Gly-sar influenciado significativamente la excreción renal de cefditoren mediante la inhibición de la reabsorción renal túbulo cefditoren través PEPT2. Los valores de CL r para cefditoren en presencia de Gly-sar fueron significativamente mayores que los de la ausencia de Gly-sar. Si JBP485 y cefalexina compiten por PEPT2 así, las cantidades de reabsorción se reduciría y el aclaramiento renal se deben aumentar. Sin embargo, nuestros resultados contradicen nuestra hipótesis, lo que sugiere que otros transportadores también están implicados en la excreción de JBP485 y cefalexina. Como se informó anteriormente (Kojima et al. 2002 Rubio-Aliaga y Daniel, 2002), antibióticos de cefalosporina no son sólo el sustrato de PEPTs pero también son transportados por OAT (Takeda et al. 1999). La avena es responsable de la secreción renal activa tubular para la orina. Consideramos que este transportador puede ser avena, que jugaron un papel importante en la excreción urinaria. Nos centramos en OAT para aclarar el mecanismo para el cambio en la CL r cuando JBP485 y cefalexina se administraron conjuntamente. Si JBP485 y cefalexina compiten con la avena, se reducirían las cantidades de secreción tubular renal en la orina. Para confirmar si JBP485 es el sustrato de la avena, elegimos probenecid (un sustrato típico de OAT) como un inhibidor para investigar si influye en la excreción urinaria de JBP485 y cefalexina in vivo. La excreción urinaria acumulativa de JBP485 y cefalexina se redujo adicionalmente a 82,9 (JBP485) y 72,2 (cefalexina), en comparación con la de los respectivos grupos de control (Fig. 6. A y B). Tomando en consideración el efecto de PEPT2 en la absorción de JBP485 y cefalexina en la excreción urinaria en vivo, estos resultados corroboran la hipótesis de que, en comparación con PEPT2, OAT tenía un papel abrumadoramente mayor en la excreción renal de JBP485 y cefalexina. En el experimento con las rebanadas de riñón, la absorción de JBP485 (Fig. 7 A) o cefalexina (Fig. 7 B) se inhibió notablemente por la adición de los dos fármacos simultáneamente. Además, Gly-sar (Fig. 8 A), HAP (un sustrato especial de OAT1) (Sweet et al., 1997 Yano et al., 1998) (Fig. 8 B), PCG (un sustrato especial de OAT3) (Matsushima et al. 2009) (Fig. 8 C) y probenecid (Fig. 8 D) todos podrían inhibir la absorción de JBP485. Estos hallazgos indicaron que JBP485 es un sustrato para ambas PEPT2 y la avena. Para demostrar aún más este hecho, hemos utilizado las células hOAT1- o hOAT3-HEK293 transfectadas para llevar a cabo el mismo experimento que con rodajas de riñón y se obtuvieron resultados similares. Es decir, JBP485 o cefalexina podría inhibir la absorción de la otra cuando se añade a la hOAT1- transfectadas o células HEK293-hOAT3 simultáneamente (Fig. 9. EH). El probenecid (Fig. 10. A y B), PAH (Fig. 10 C), y PCG (Fig. 10 D) podría inhibir la absorción de JBP485. Tomados en conjunto, nuestros resultados indican que al menos dos tipos de transportadores (PEPT2 y avena) participan en la excreción de JBP485 y cefalexina en los riñones. En conclusión, hay interacciones fármaco-fármaco entre JBP485 y cefalexina cuando se administran conjuntamente. Los objetivos de interacción son PEPT1 en los intestinos y PEPT2 así como avena en los riñones. Nuestros resultados son nuevos en demostrar por primera vez que la droga JBP485 dipéptido es el sustrato no sólo de PEPTs sino también de la avena. Expresiones de gratitud. Agradecemos especialmente el Dr. Yuichi Sugiyama (Facultad de Ciencias Farmacéuticas de la Universidad de Tokio, Tokio, Japón) y el Dr. Likun Gong (Shanghai Instituto de Materia Médica, Academia de Ciencias de China, Shanghai, China) para proporcionar hOAT1- y hOAT3- células HEK293.